流感病毒研究中BeaverBeads Protein A/G 抗體純化磁珠的應(yīng)用
中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所徐明愷團(tuán)隊(duì)在eLife上發(fā)表的文章介紹了一個包含流感病毒保守表位和超抗原的重組蛋白誘導(dǎo)廣譜保護(hù)。
研究背景 每年流感疫情的爆發(fā)給公共安全造成巨大的威脅。一直以來，能夠應(yīng)對新出現(xiàn)的流感病毒的疫苗都處于短缺狀態(tài)。為解決這一問題，結(jié)合誘導(dǎo)交叉保護(hù)抗體反應(yīng)的保守抗原與激活交叉保護(hù)T細(xì)胞反應(yīng)的表位是可采取的策略之一。
中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所徐明愷團(tuán)隊(duì)在eLife上發(fā)表的文章介紹了一個包含流感病毒保守表位和超抗原的重組蛋白誘導(dǎo)廣譜保護(hù)。在這次研究中，研究者設(shè)計(jì)構(gòu)建了一種名叫NMHC的重組蛋白，這種蛋白包含了流感病毒的保守性表位和超級抗原片段。
NMHC重組蛋白由核蛋白NP（一種流感病毒的保守內(nèi)部抗原），基質(zhì)蛋白2外域M2e（一種在甲型流感病株內(nèi)高度保守的多肽），血凝素莖區(qū)HA2上高度保守的α螺旋結(jié)構(gòu)和SEC2（用于強(qiáng)化抗原性的細(xì)菌超抗原葡萄球菌腸毒素C2）組成。研究者用BeaverBeads Protein A/G抗體純化試劑盒，對血清中抗體進(jìn)行純化，純化后的抗體與NMH形成穩(wěn)定絡(luò)合物的能力，后續(xù)通過pull-down實(shí)驗(yàn)來確認(rèn)：將抗體與NMH孵育，用BeaverBeads Protein A/G磁珠拉下NMH。分離上清，洗脫并中和磁珠上的抗體后，用SDS-PAGE分析結(jié)合與未結(jié)合上的抗體比例。
圖.重組蛋白設(shè)計(jì)、純化、復(fù)性和驗(yàn)證
研究結(jié)果顯示，重組蛋白NMHC促進(jìn)了B細(xì)胞和T細(xì)胞的對流感病毒感染的免疫反應(yīng)。NMHC的SEC2端促進(jìn)了樹狀細(xì)胞的成熟，成熟的樹狀細(xì)胞將NMH端的抗原呈現(xiàn)給CD4+ T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞。這一過程促進(jìn)了CD4+ T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞的活化，增殖和分化。因此，研究者提議將NMHC作為預(yù)防多種流感的通用型疫苗備選。
BeaverBeads Protein A/G 為納米級磁性微球，適用于血漿、腹水、組織培養(yǎng)上清液等樣品中的抗體純化，也可以用于抗體固定及其它研究，其優(yōu)勢：
1.具有超大比表面積、超強(qiáng)的抗體結(jié)合力；
2.表面親水化處理，具有較低的非特異性吸附；
3.洗脫條件溫和，一步即可從血清樣品中分離出純度>90%的抗體。
配合磁性分離器，可在10min內(nèi)完成抗體吸附過程，30min內(nèi)完成抗體純化流程，大幅度縮短抗體純化所需的時間。此外，配合預(yù)制緩沖液，為抗體純化實(shí)驗(yàn)提供了最佳的反應(yīng)條件，提高了抗體純化實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性。
